Создание клеточных линий ТК6, экспрессирующих CYP
Клетки 293Т высевали с плотностью 1,8×106 клеток на лунку в 6-луночные планшеты для тканевых культур. После ночной инкубации клетки использовали для дальнейших экспериментов.
Дополнительно:
Обзор «Wester Cowboy Gun». Стрельба двумя стиками на Диком Западе
- Клеточные линии – это популяции клеток, которые растут в культуре и сохраняют свои характеристики в течение длительного времени.
- Тканевые культуры – это метод культивирования клеток или тканей в контролируемых условиях вне организма.
- Планшеты для тканевых культур – это пластиковые пластины с лунками, используемые для выращивания клеток.
- Индукция экспрессии – это процесс запуска производства определенного белка в клетках путем добавления индуцирующего агента.
Как культивировать клетки ТК6?
Культивирование клеток ТК6
Клетки ТК6, выведенные из почки эмбриона человека, обладают уникальными характеристиками, которые делают их ценным инструментом для изучения генотоксических и цитотоксических эффектов химических веществ.
Ключевые особенности клеток ТК6:
- Человеческое происхождение: обеспечивает непосредственную релевантность для исследований на человеке.
- Экспрессия белка p53 дикого типа: участвует в репарации ДНК и апоптозе, что повышает их чувствительность к генотоксичным агентам.
Эти свойства позволяют клеткам ТК6 имитировать реакцию неповрежденных клеток человека на химические вещества, что делает их более подходящими для оценки рисков для здоровья человека, чем клетки, полученные от других видов млекопитающих.
Masters of Anima. Подробный обзор игры
Кроме того, клетки ТК6 являются относительно устойчивыми к культивированию, что облегчает проведение длительных исследований. Они образуют монослои на традиционных культуральных пластиках и инкубируются при обычных условиях (37 °C, 5% CO2).
Опасности и риски:
Как и при работе с любыми клеточными линиями, при работе с клетками ТК6 необходимо соблюдать меры биологической безопасности. Следует использовать надлежащие лабораторные средства индивидуальной защиты, такие как перчатки, лабораторные халаты и защитные очки. Следует работать в биологическом защитном шкафу для предотвращения воздействия аэрозолей и загрязнения.
Как рассчитать клеточную культуру в клетках?
Вы можете рассчитать концентрацию клеток, используя следующую формулу: Общее количество клеток/мл = (Общее количество подсчитанных клеток x Коэффициент разведения x 10 000 клеток/мл)/Количество подсчитанных квадратов. Общее количество клеток/мл = (325 клеток x 2 x 10 000 клеток/мл)/5 = 130 x 10 4 клеток/мл. Общее количество клеток в образце = 130 x 10 4 клеток/мл x 5 мл = 650 x 10 4 клеток.
Что такое лимфобластоидная клетка?
Лимфобластоидные клеточные линии (LCL) – это иммортализованные клетки, полученные путем трансформации первичных B-клеток крови вирусом Эпштейна-Барр (EBV).
- LCL используются для исследований лейкемии и лимфомы.
- Они являются ценным инструментом для изучения генетики и иммунологии рака.
На что влияет плотность посева?
Плотность посева, определяемая как количество клеток на единицу площади, играет критическую роль в регулировании поведения клеток и физиологических процессов в культуре клеток.
Пролиферация клеток: Более высокая плотность клеток может стимулировать пролиферацию, поскольку конкурентные взаимодействия за питательные вещества и факторы роста запускают сигнальные пути, связанные с ростом.
Дифференциация клеток: Оптимальная плотность клеток помогает поддерживать стволовые клетки в недифференцированном состоянии, в то время как более высокая плотность может направлять клетки к дифференцировке.
Синтез внеклеточного матрикса (ECM): Повышенная плотность клеток увеличивает выработку ECM, такого как коллаген, который обеспечивает структурную поддержку и влияет на клеточную функцию.
Исследования показали, что оптимизация плотности посева может улучшить тканевую инженерию, исследование рака и производство терапевтических белков. Понимание роли плотности посева в клеточной биологии имеет решающее значение для разработки эффективных протоколов культивирования и применения в биотехнологических и медицинских целях.
Что такое ТК6?
ТК6 (рутинные культуры клеток) используются в лабораторных испытаниях на генотоксичность.
- Конечные пользователи размораживают криоконсервированные клетки в среде
- Затем клетки размножают для получения лабораторных исходных образцов
- Как правило, через 2-3 дня клетки начинают активный логарифмический рост
Какова плотность посева клеток u2os?
Линия U2OS не представляет собой линию ТК6, которая выделена из селезенки пациента с наследственным сфероцитозом. U2OS – это остеосаркома человека, которая используется в качестве модельной клеточной линии для различных исследований.
Плотность посева клеток U2OS зависит от конкретного эксперимента и может варьироваться. Обычно плотность посева составляет от 10 000 до 50 000 клеток/см2.
Характеристики клеточной линии U2OS:
- Происхождение: Остеосаркома человека
- Геном: Диплоидный
- Удвоение времени: ~24 часа
- Морфология: Удлиненные и веретенообразные клетки
- Приложения: Исследования рака, клеточной биологии, фармакологии и токсикологии
Дополнительная информация:
- U2OS является одной из наиболее широко используемых клеточных линий в биологических исследованиях.
- Линия была впервые выделена в 1964 году из остеосаркомы 15-летней девочки.
- Клетки U2OS легко трансфицируются и могут использоваться для экспрессии различных генов.
Как рассчитать клеточную культуру?
Расчет концентрации клеточной культуры
Методика: 1. Подсчет жизнеспособных клеток: Подсчитайте количество жизнеспособных клеток в четырех наборах по 16 квадратов в камере Горяева. 2. Среднее значение: Вычислите среднее количество жизнеспособных клеток. 3. Концентрация клеток (клеток/мл): Умножьте среднее значение на 10 000. Это число представляет количество клеток на миллилитр. 4. Корректировка разбавления: Умножьте концентрацию клеток на 5, поскольку в процессе добавления трипанового синего происходит разбавление один к пяти. Пример: Предположим, что среднее количество жизнеспособных клеток в четырех наборах составляет 120. Концентрация клеток = 120 x 10 000 = 1,2 млн. клеток/мл Корректировка разбавления: 1,2 млн. клеток/мл x 5 = 6 млн. клеток/мл
Как рассчитать плотность посева?
Расчет плотности посева клеток
- Определите необходимое количество клеток.
- Определите концентрацию клеток, выраженную в клетках на миллилитр (мл).
- Разделите необходимое количество клеток на концентрацию, чтобы получить необходимый объем.
Каков нормальный процент лимфоцитов?
Нормальный диапазон лимфоцитов составляет 20-40%. Это основной тип лейкоцитов, отвечающих за иммунитет.
Другие нормальные процентные значения лейкоцитов:
- Моноциты: 2-8%
- Эозинофилы: 1-4%
- Базофилы: 0,5-1%
Какова функция ТК-клетки?
ТК (тимидинкиназа) играет жизненно важную роль в клеточном цикле благодаря своему ферментативному действию. Оно преобразует дезокситимидин в дезокситимидинмонофосфат, что является ключевым этапом для синтеза ДНК. Активность ТК достигает пика в контрольной точке G1-S, гарантируя наличие достаточного количества строительных блоков для репликации ДНК.
Насколько велики лунки в 6-луночном планшете?
Шестилуночные планшеты предлагают максимально большую культивируемую поверхность среди всех многолуночных планшетных продуктов, обеспечивая оптимальное культивирование клеток.
Доступны три варианта диаметров микролунок:
- 10 мм
- 14 мм
- 20 мм
Эти планшеты обеспечивают удобное обращение и превосходную однородность культивирования. Кроме того, их конструктивные особенности оптимизированы для различных применений, таких как иммуноферментный анализ (ИФА) и исследования клеточной пролиферации.
Передача клеток: основы клеточной культуры
Передача клеток: основы клеточной культуры
Для поддержания оптимального роста клеток и предотвращения переполнения в культуре рекомендуется придерживаться рекомендованной плотности посева, которая обычно составляет 2 × 104 клеток/см2.
Частичная замена среды за 24 часа до проведения субкультуры может способствовать стимуляции роста клеток. Это связано с тем, что удаление отработанных питательных веществ и добавление свежей среды улучшают условия для роста и деления клеток.
Дополнительная информация: * Контроль плотности клеток имеет решающее значение для поддержания здоровой клеточной культуры. Переполненность может привести к замедлению роста, гибели клеток и накоплению отходов. * Субкультура — это процесс передачи клеток в новую среду, когда они достигают определенной плотности. Это позволяет разбавлять культуру и поддерживать оптимальные условия для роста. * Оптимизация условий среды путем регулирования факторов роста, pH и осмотичности может значительно улучшить рост и функциональность клеток. * Использование специализированных субстратов для роста (например, коллагена или фибронектина) может улучшить прикрепление и дифференцировку клеток, особенно для требовательных типов клеток.
Как количественно оценить количество клеток в клеточной культуре?
Для количественной оценки количества клеток в культуре используйте метод колониеобразующих единиц (КОЕ).
- Высейте клетки на чашку Петри с питательной средой.
- Каждая клетка, эффективно распределенная по чашке, потенциально даст начало одной КОЕ (колонии).
- Подсчитав количество КОЕ, вы получите количественный показатель количества клеток в исходной культуре.
Откуда берется клеточная линия C 6?
ПЕР. Линия клеток C6 была разработана в Crucell путем трансфекции первичных эмбриональных ретинобластов человека трансгеном E1, сконструированным с минимальным количеством кодирующих последовательностей E1 для предотвращения гомологичной рекомбинации, генерирующей компетентный к репликации аденовирус, между последовательностями E1 в PER.
Что такое клетки L6?
Клетки L6 представляют собой культивируемую линию клеток, полученную из скелетных мышц крысы.
- Особенности:
- Размножаются как одноядерные миобласты.
- Способны дифференцироваться в многоядерные первичные мышечные трубочки.
- Экспрессия ферментов, характерных для скелетных мышц:
- Транспортер глюкозы GLUT4
- Креатинфосфокиназа (CPK)
- Миозин
- Тропонин
Клетки L6 широко используются в исследованиях:
- Дифференцировки скелетных мышц
- Метаболизма скелетных мышц
- Нервно-мышечного взаимодействия
- Тестирования фармакологических агентов, направленных на лечение заболеваний скелетных мышц
Что такое плотность посева в культуре клеток?
Плотность посева в культуре клеток – это начальное количество живых клеток, внесенных в среду культивирования.
Оптимальная плотность посева – критичный параметр в функциональной тканевой инженерии. Достаточное количество клеток, равномерно распределенных по каркасу, является необходимым условием для поддержания гомогенного синтеза внеклеточного матрикса in vitro.
При выборе плотности посева следует учитывать:
- Тип клеток. Разные типы клеток имеют разные потребности в пространстве.
- Размер и форма каркаса. Чем больше каркас, тем больше клеток потребуется для его заселения.
- Цель исследования. Более высокие плотности посева обычно обеспечивают большую плотность клеток и более быстрый синтез ткани, но могут также ограничивать диффузию питательных веществ и кислорода.
Оптимизация плотности посева позволяет исследователям достичь наилучших результатов при выращивании тканевых конструктов, таких как:
- Улучшенная жизнеспособность клеток
- Повышенная продукция внеклеточного матрикса
- Создание более однородных и функциональных тканевых конструктов
Что такое посев в культуре клеток?
Посев клеток — важнейший этап в культивировании клеток. Это контролируемый перенос клеток в культуральный сосуд, где происходит их рост и размножение.
- Прикрепившиеся клетки высевают на поверхность, обработанную для улучшения адгезии.
- Клеточная суспензия добавляется в сосуд с обработанной поверхностью, обеспечивающей оптимальные условия для роста клеток.
Какова плотность клеток в клеточной культуре?
Плотность клеток в клеточной культуре определяется содержанием воды и составом сухой массы. Относительное содержание воды в клетке приближается к 1 г/мл, что является основным фактором, влияющим на плотность.
Содержание клеточной воды варьируется в зависимости от типа клеток и условий культивирования и составляет 60-80%:
- В быстрорастущих клетках содержание воды обычно выше.
- Увеличение содержания питательных веществ в среде также приводит к увеличению содержания воды.
- Помимо содержания воды, на плотность клеток влияет состав сухой массы, в которую входят белки, липиды, углеводы и неорганические молекулы.
Для поддержания оптимальной плотности клеток в клеточной культуре необходимо контролировать факторы, влияющие на состав клеточной воды, в том числе:
- Осмотическое давление среды
- Концентрация ионов
- Доступность питательных веществ
Каков нормальный процент лимфобластов?
Лимфобласты в костном мозге:
- У детей: До 5% (нормальный уровень)
- У взрослых: До 1% (нормальный уровень)
Является ли ХЛЛ Т- или В-клеткой?
Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) представляет собой гетерогенную группу заболеваний, возникающих из мутировавших В-лимфоцитов.
- Подавляющее большинство людей с ХЛЛ (более 95%) имеют В-клеточный тип. Это наиболее распространенный подтип ХЛЛ.
- Приблизительно 1% людей с В-клеточным ХЛЛ имеют подтип, известный как B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз (PLL).
- Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз (ранее классифицировавшийся как Т-клеточный ХЛЛ) представляет собой отдельный тип лейкоза, который отличается от ХЛЛ мутациями и клиническим течением.
Что такое высев клеток на см2?
Плотность посева клеток (клеток/см2) — это число клеток, высаженных на каждый квадратный сантиметр ростовой поверхности.
Плотность посева позволяет стандартизировать данные о росте и пролиферации клеток, поскольку она:
- Делает данные независимыми от размера ростового сосуда
- Обеспечивает равномерное распределение клеток на поверхности
В то же время, общее количество клеток зависит от площади ростовой поверхности. Чем больше площадь, тем больше клеток можно вырастить.
Оптимальная плотность посева для конкретного типа клеток определяется экспериментально и зависит от:
- Типа клеток
- Используемой ростовой среды
- Желаемого уровня пролиферации
- Используемого метода посева
Что такое плотность семян?
Посевная плотность представляет собой количество семян, равномерно распределенных на единицу площади, обычно выражаемое в семенах на метр борозды или квадратный метр.
Ключевым фактором, влияющим на посевную плотность, является размер семени. Более крупные семена, такие как бобы или кукуруза, высевают на большей глубине и с меньшей плотностью. Мелкие семена, такие как морковь или салат, высевают ближе к поверхности и с более высокой плотностью.
Оптимальная посевная плотность зависит от следующих факторов:
- Тип культуры
- Условия окружающей среды
- Цель производства (коммерческое выращивание, производство семян)
Правильная посевная плотность обеспечивает оптимальное использование ресурсов растениями и способствует высокой урожайности и качеству.
Что произойдет, если плотность посева слишком высока?
Чрезмерная плотность клеток приводит к быстрому истощению питательных веществ в среде. Это может привести к внезапной гибели клеток из-за резкого прекращения роста.
Как правило, если плотность клеток слишком высока, лаг-фаза роста затягивается, а рост клеток значительно замедляется. В экстремальных случаях клетки могут даже погибнуть.